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        荧光显微镜的使用方法和操作规程

        2020-10-21
        1.用窗帘遮蔽光线,关闭房间内的灯光,除去显微镜的防尘罩,确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱,并转动灯箱卡圈上的拨杆,将灯箱与镜臂连接。
        2.将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座,再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。
        3.打开电源开关,电压表显示出电源电压,如电源电压波动不大于额定电压值的±5%,即可按下启动开关点燃汞灯,如因天气太冷或电压不稳定等原因,一次启动未点燃汞灯,可以多揿动几次。待高压汞灯弧光达到稳定状态并达到较大发光效率,即可开始工作。
        4.灯泡的调中:
        (1)任选一块标本放在载物台上;
        (2)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将10X荧光物镜转入光路;
        (3)调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰;
        (4)前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小,调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中,然后再将视场光栏开至较大;
        (5)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞灯的弧光在视场内成像清晰;
        (6)调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中;
        (7)调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使光源的反射像与汞灯的弧光分开;
        (8)转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀。
        5.荧光观察:
        (1)将荧光染色标本放到载物台上。
        (2)将10X平场物镜或40X荧光物镜转入光路,调节载物台纵横移动手轮,将标本移入光路。
        (3)转动滤光片转换拨轮,将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。滤光片选择正确与否,是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时,必须遵守斯托克斯定律:激发滤光片的透射波长<双色束分离器的透射波长<阻断滤光片的透射波长。
        由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片,出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配,在观察和摄影时,只需选择滤光片组即可。
        (4)调节粗调手轮,当看清荧光图像轮廓后,再用微调手轮调焦,直至看到清晰的荧光图像。
        (5)当需要得到较强的荧光图像时,可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路,可获得较明亮的荧光图像。
        (6)当需要使用40X或100X荧光物镜观察时,应在标本和物镜间加上甘油,油中不能有影响观察的小泡或杂质。使用时可使甘油慢慢浸润一会儿,然后轻轻左右来回转动物镜转换器以排除气泡。
        6.荧光显微摄影——显微镜摄像头
        由于荧光图像一般均较明场观察暗得多,所以进行荧光显微摄影需要较长的曝光时间,在曝光时应注意避免仪器震动。
        荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。
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